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技術文章

ELISA常用檢測法—競爭法原理介紹

點擊次數:10358 發布時間:2017/5/17 10:02:29

    做ELISA實驗,有幾種常見的實驗方法,他們分別是競爭法、捕獲法、間接法、夾心法、而夾心法又可以分為雙抗體夾心法和雙抗原夾心法!在今天的文章中,將詳細得跟大家講述競爭法的實驗原理!


    競爭法一般分為直接競爭法和間接競爭法,這里我們以直接競爭法為例進行原理講解。直接競爭法,其基本原理是:將合適濃度的包被抗體包被于微孔板中,加入無關蛋白載體封閉未結合位點,加入標準品(樣本)和生物素標記的抗原物質進行競爭結合,經合適的溫度和一定時間的孵育,洗滌后,加入HRP標記的鏈霉親和素進行反應,TMB顯色,微孔板中顏色的深淺與待測物的濃度呈負相關。
 
    該方法一般用來檢測具有較少表位的小分子物質,當然,這種方法也可以用來檢測大分子抗原物質甚至是抗體。檢測大分子抗原物質時,由于空間位阻的影響,使得該檢測方法沒有雙抗體夾心法檢測大分子抗原物質靈敏度高。這種方法在檢測抗體時,可能由于兩種競爭的抗體來源不一,導致兩種抗體趨同性不高,就使得檢測結果的可靠性不高。

原創作者:上海elisa生物技術有限公司

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